
鉴定书上的原文:
关于一盒肉的鉴定报告
委托方:王群一
鉴定方:杭州博兴基因技术有限公司
委托事项:鉴定待鉴定的样品是牛肉还是猪肉
送检材料:A公认牛肉标样,B待鉴定肉样品,C公认猪肉标样
主要实验仪器:电子天平、恒温水浴锅,台式离心机,PCR仪,电泳仪,紫外检测仪,数码相机。
主要试剂:DNA提取液(本室自配)、酚/氯仿/异戊醇、Taq酶、DNA maker。
实验共分三个步骤。
第一步 DNA提取
1. 样品分别用刀片切碎,1.5ml 离心管中加入约100mg样品,加600 μlDNA提取溶液(pH8.0) 旋涡混匀,加入5μl 10mg/ml 蛋白酶K,56℃水浴60min;
2. 12000g离心5min,取上清转移到新的1.5ml管子中;
3. 加600μl酚:氯仿:异戊醇(25:24:1) 剧烈振荡,12000g 离心10min;
这些步骤共6个程序,要花去两个多小时。通俗的解释是:
先是把上面的三种肉用小刀切成末,各取两个大米那么大的小块,放在大约有一粒花生米那么多的溶液里,加进去蛋白酶,放在56℃的温水里泡一小时,再放在每分钟12000转的离心机上拼命转,肉里的DNA连溶解带甩地就出来了,再加溶液,再甩……反复好几次,最后就得到比较纯的DNA水溶液了。
第二步 牛、猪源性成分P C R 检测
PCR 反应体系10 buffer(含Mg2+)2.5μl,dNTP终浓度100μM, 引物niuU、niuL (zhuU、zhuL)的终浓度均为0.2 mol/L 模板DNA 为1μl……94 变性30s 58℃ 退火30s 72℃延伸30s 32 个循环, 72℃延伸5min……
这一步其实就是为了证明刚才提出的DNA是好的,能用。
用的是电泳的方法——电泳就是在带电环境下,让DNA游泳。